溶解多肽是非常復雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗,在沒有確定合適的溶劑前千萬不要全部溶解。
下列方法有助于您選擇合適的溶劑:
(1) 判定多肽的電荷特定,設定酸性氨基酸Asp(D), Glu(E)和C端COOH為-1; 堿性氨基酸Lys(K), Arg(R), His(H)及N端NH2為+1, 其它氨基酸的電荷為0。計算出將電荷數。
(2) 如果凈電荷數>0,多肽為堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上); 如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(3) 如果凈電荷數<0,多肽為酸性,用水溶解; 如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(4) 如果凈電荷數=0,多肽為中性,一般需要用有機溶劑如乙腈,甲醇或異丙醇,DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。
多肽的溶解性很大程度上取決于多肽的極性。酸性的蛋白溶解于堿性溶液,而堿性蛋白可溶解于酸性溶液,含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有機溶劑中,如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇,然后加水(蒸餾水)稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解,因為DMSO可能造成側鏈氧化。
多肽溶解測試: 在多肽溶解之前先取小部分進行多肽溶解測試,您需要測試幾種不同的溶劑,直到找到最適當的一種(根據實驗需求及溶解性實驗確定)。超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。(注意: 超聲處理會引起溶液發熱和多肽降解。)